Molecular biological nga pamaagi sa panukiduki ug sa ilang paggamit

Molecular biological nga pamaagi sa research play sa usa ka importante nga papel sa modernong medisina, forensic siyensiya, ug biology. Salamat sa pag-uswag sa sa pagtuon sa DNA ug RNA, ang tawo mao ang makahimo sa pagsusi sa genome sa mga organismo sa pagtino sa causative ahente, sa pag-ila sa gitinguha nga mga nucleic acid sa usa ka sinagol nga mga asido, ug uban pa

Molecular-biological nga pamaagi. Unsa kini?

Balik sa 70-80s sa mga siyentipiko mao ang una nga decipher sa tawhanong genome. Kini nga panghitabo mihatag impetus ngadto sa pagpalambo sa genetic engineering ug molecular biology. Pagtuon sa mga kabtangan sa DNA ug RNA nga nagpasabot nga kini mao ang posible nga karon sa paggamit niini nga mga nucleic acid alang sa katuyoan sa sakit panghiling, pagtuon sa gene.

Pagpangandam sa DNA ug RNA

Molecular biological nga diagnostic nga mga pamaagi nagkinahanglan sugod sa materyal nga: sagad kining nucleic acid. Adunay daghang mga paagi sa pagpili niini nga mga butang gikan sa mga selula sa buhi nga mga organismo. Ang matag usa adunay iyang bentaha ug disbentaha, ug kini kinahanglan nga giisip nga sa diha nga ang pagpili sa usa ka pamaagi sa nagalain sa nucleic acid sa lunsay nga nga dagway.

1. Pagpangandam sa DNA sa Marmur. nga pamaagi naglangkob sa pagtagad sa mga sagol nga sa mga butang alkohol, mopadali sa miresulta lunsay nga DNA. Ang downside sa niini nga paagi mao ang paggamit sa makadaot nga mga butang, phenol ug ang chloroform.

2. inusara sa DNA sa boom. Ang nag-unang bahandi nga gigamit dinhi - ang guanidine thiocyanate (GuSCN). Kini nagpasiugda sa pagsaksi sa deoxyribonucleic acid sa espesyalista substrates, nga kini mahimo nga sunod nga nakolekta sa paagi sa usa ka espesyal nga buffer. Apan GuSCN - mao ang usa ka tigdili, tigpugong sa TCP, ug bisan sa usa ka gamay nga bahin sa nga gets gibutang sa DNA makaimpluwensya sa dagan sa mga polymerase kadena nga reaksyon, nga mao ang importante nga sa diha nga nagtrabaho uban sa mga nucleic acid.

3. ulan sa mga impurities. pamaagi sa lahi gikan sa miaging mga sa nga ang mga molekula sa ilang kaugalingon dili deposito dehoksiribonukleinovoy acid ug mga hugaw. Sa pagbuhat niini, sa paggamit sa mga Ion exchanger. Disbentaha mao nga dili tanang mga butang mahimo nga masulbad.

4. Misa screening. Kini nga pamaagi gigamit sa mga kaso sa diha nga kamo dili kinahanglan nga adunay tukma nga impormasyon mahitungod sa gambalay sa DNA molekula, ug sa panginahanglan sa pagkuha sa pipila ka mga estadistika. Ang rason mao nga ang mga nucleic acid gambalay mahimong naguba sa diha nga pagdumala sa detergents, ilabi alkali.

Klasipikasyon sa mga pamaagi sa research

Ang tanan nga molecular-biological nga pamaagi sa research gibahin ngadto sa tulo ka dagkong mga grupo:

1. ginansiya (paggamit sa usa ka dinaghan nga mga enzymes). Kini naglakip sa PCR - polymerase kadena nga reaksyon, nga pasundayag usa ka importante nga papel sa daghan sa mga diagnostic mga pamaagi.

2. Neamplifikatsionnye. Kini nga grupo sa mga mga pamaagi nga nakig-direkta sa mga buhat sa mga nucleic acid panagsagol. Mga panig-ingnan mao ang 3 matang mopapas, sa situ Hybridization, ug uban pa

3. Pamaagi base sa pag-ila sa mga signal gikan sa probe molekula, nga naghigot sa usa ka piho nga DNA o RNA imbestigasyon. Panig-ingnan - Hybridization sistema Hybride Makuha System solusyon (hc2).

Enzyme nga mahimong gigamit sa molecular biological nga pamaagi sa research

Daghang mga molecular diagnostic teknik naglangkit sa paggamit sa halapad nga-laing mga enzymes. Ubos gigamit kasagaran:

1. restriction enzyme - "giputol" sa molekula sa DNA sa gikinahanglan nga mga bahin.

2. DNA polymerase - synthesizes sa usa ka double-stranded deoxyribonucleic acid molekula.

3. Reverse transcriptase (makausab transcriptase) - gigamit sa synthesize DNA gikan sa usa ka RNA template.

4. DNA ligase - mao ang responsable alang sa pagporma sa phosphodiester talikala tali sa nucleotides.

5. exonuclease - removes nucleotides gikan sa katapusan bahin sa deoxyribonucleic acid molekula.

PCR - ang nag-unang mga pamaagi sa DNA ginansiya

Polymerase kadena nga reaksyon (PCR) ang kaylap nga gigamit sa modernong molecular biology. Kini nga pamaagi, diin sa usa ka molekula sa DNA mahimo nga nakuha sa usa ka dako nga gidaghanon sa mga kopya (pagpadako molekula).

Ang nag-unang gimbuhaton sa PCR:

- diagnosis sa mga sakit;

- cloning bahin DNA, Gene.

Aron sa pagtuman sa polymerase kadena nga reaksyon nagkinahanglan sa mosunod nga mga elemento: inisyal nga molekula sa DNA, usa ka thermostable DNA polymerase (Taq o Pfu), deoxyribonucleotide phosphate (mga tinubdan sa mga base nitroheno), ang mga primers (2 pasi-una 1 DNA molekula) ug sa iyang kaugalingon sa usa ka buffer sistema nga pagpahigayon sa tanan nga mga reaksyon.

PCR naglangkob sa tulo ka mga lakang: denaturation, pasi-una annealing ug elongation.

1. denaturation. Sa usa ka temperatura sa 94-95 degrees Celsius proshodit sa pagguba sa mga gapus idroheno tali sa duha ka talikala nga magagmay nga DNA, ug ingon sa usa ka resulta kita sa duha ka single-stranded molekula.

2. annealed primers. Sa usa ka temperatura sa 50-60 degrees centigrade mahitabo paglingkod sa trono primers sa mga tumoy sa single-stranded nucleic acid molekula sumala sa matang sa complementarity.

3. Elongation. Sa usa ka temperatura sa 72 degrees ang artipisyal nga anak nga babaye nga pinilo natanggong deoxyribonucleic acid molekula.

DNA serye

Molecular biological nga pamaagi sa research sa kasagaran nagkinahanglan kahibalo sa han-ay sa mga nucleotides sa usa ka molekula sa deoxyribonucleic acid. Aron sa pagtino sa genetic code sequenced. Molecular diagnostics sa umaabot nga base sa kahibalo nga naangkon sa determinasyon sa mga han-ay sa tawo.

Ang mosunod nga mga matang sa serye:

• serye sa Maxam-Gilbert;
• Sanger serye;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe serye.